目的 探讨慢病毒靶向沉默Bmi-1基因对鼻咽癌细胞CNE2生物学行为的影响.方法 设计3条Bmi-1shRNA干扰系列,构建慢病毒重组载体PLVx-shRNA2-Bmi-1,用重组载体转染293T细胞,收集上层病毒液浓缩、滴定.将CNE2细胞随机分为5组,对照组不进行感染,shRNA1、2、3组分别感染表达shRNA1、2、3的慢病毒,空载体组感染空载的慢病毒.感染48 h,用RT-PCR及Western blotting法分别检测Bmi-1基因及蛋白的相对表达量,筛选沉默Bmi-1效率最佳的干扰序列.用平板克隆形成实验检测Bmi-1基因沉默后CNE2细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布.结果 插入的序列与设计的3条shRNA序列碱基排列一致,说明目的片段均已正确插入,PLVx-shRNA2-Bmi-1慢病毒表达载体构建成功.与其他两组比较,Bmi-1-shRNA1、2、3组Bmi-1 mRNA及蛋白相对表达量低(P均＜0.05),Bmi-1-shRNA3组最低(P均＜0.05),沉默效率最佳.与空载体组比较,Bmi-1-shR-NA3组增殖能力弱(P均＜0.05),细胞凋亡率高(P均＜0.05),Bmi-1-shRNA3组G1期细胞比例高、S期细胞比例低(P均＜0.05).结论 沉默Bmi-1基因可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖、促进其凋亡,并改变细胞周期.
作者：王巧；罗清；李亚军；邹彦
来源：山东医药 2018 年 58卷 5期
