目的 探讨miR-424在人脂肪来源间充质干细胞(hASC)成骨分化中的表达及miR-424对hASC体外成骨分化的生物学作用.方法 qPCR检测miR-424在hASC成骨分化不同阶段的表达水平.通过慢病毒颗粒在体外感染hASC,使miR-424过表达或抑制其表达,进行Western blotting、细胞免疫荧光试验及碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色试验,研究miR-424对骨形态发生蛋白2(BMP-2)及成骨诱导液诱导hASC成骨分化过程的影响.预测miR-424的靶基因,并利用qPCR及Western blotting验证.结果 qPCR结果显示miR-424在hASC的表达量随着成骨诱导时间延长逐渐下降(P＜0.05).在BMP-2诱导下,过表达组的碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)蛋白水平均下降,而抑制组的表达增加(P＜0.05).细胞免疫荧光显示,过表达miR-424的细胞骨唾液酸蛋白(BSP)阳性率显著下降(P＜0.05).ALP和ARS染色显示,过表达组ALP活性降低,钙盐沉积下降,而抑制组ALP活性升高,矿化能力增强.过表达miR-424能降低hASC中Smad5的mRNA和蛋白水平,而抑制miR-424则使其水平升高(P＜0.05).结论 miR-424在hASC成骨分化中表达下调,其在hASC体外成骨分化过程中起抑制作用.
作者：余章；黄雅琢；杨潇璇；肖彩雯
来源：上海交通大学学报（医学版） 2016 年 36卷 7期
