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目的 建立体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSC)向黑素细胞分化的方法.方法 由人皮下脂肪分离培养获得hADSC,流式细胞仪检测细胞表型,成骨成脂分化证明分化潜能.将干细胞生长因子(SCF)、内皮素3(EDN-3)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等加到条件培养基中,促使第5代hADSC向黑素细胞方向诱导,诱导至第10周.未诱导组为正常对照组.使用实时荧光定量PCR检测黑素相关基因小眼畸形转录因子(MITF),酪氨酸激酶受体c-Kit(KIT),多巴色素异构酶(DCT),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1),性别决定区域相关转录因子10(SOX10) mRNA的表达量,统计学分析采用单因素方差分析及LSD-t检验.诱导结束后,通过免疫细胞化学法、细胞免疫荧光法进行鉴定.结果 流式细胞仪显示分离培养获得的hADSC高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,阳性率均在95%以上;低表达或不表达CD31、CD34、CD45,人白细胞DR抗原(HLA-DR).成骨成脂分化结果显示hADSC具有分化潜能.实时荧光定量PCR结果显示,诱导10周后,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的表达水平分别为0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,与诱导0周组相比,均有上调(P<0.05).诱导结束后,免疫细胞化学MITF、HMB45染色阳性,细胞免

作者:闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅

来源:中华皮肤科杂志 2014 年 47卷 2期

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作者:
闵敏;张雪静;马红;许辉;李遇梅
来源:
中华皮肤科杂志 2014 年 47卷 2期
标签:
人脂肪间充质干细胞 分化 黑素细胞 Human adipose-derived mesenchymal stem cells Cell differentiation Melanocytes
目的 建立体外诱导人脂肪间充质干细胞(hADSC)向黑素细胞分化的方法.方法 由人皮下脂肪分离培养获得hADSC,流式细胞仪检测细胞表型,成骨成脂分化证明分化潜能.将干细胞生长因子(SCF)、内皮素3(EDN-3)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等加到条件培养基中,促使第5代hADSC向黑素细胞方向诱导,诱导至第10周.未诱导组为正常对照组.使用实时荧光定量PCR检测黑素相关基因小眼畸形转录因子(MITF),酪氨酸激酶受体c-Kit(KIT),多巴色素异构酶(DCT),酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP1),性别决定区域相关转录因子10(SOX10) mRNA的表达量,统计学分析采用单因素方差分析及LSD-t检验.诱导结束后,通过免疫细胞化学法、细胞免疫荧光法进行鉴定.结果 流式细胞仪显示分离培养获得的hADSC高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,阳性率均在95%以上;低表达或不表达CD31、CD34、CD45,人白细胞DR抗原(HLA-DR).成骨成脂分化结果显示hADSC具有分化潜能.实时荧光定量PCR结果显示,诱导10周后,MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的表达水平分别为0.325±0.012,0.042±0.006,0.046±0.013,0.036±0.005,0.041±0.003,0.225±0.014,与诱导0周组相比,均有上调(P<0.05).诱导结束后,免疫细胞化学MITF、HMB45染色阳性,细胞免