目的 探讨缺氧条件下HCCLM3细胞趋化因子CCL28表达情况及作用.方法 实时定量PCR和ELISA方法检测缺氧条件下肝癌细胞HCCLM3趋化因子CCL28表达水平;运用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和Lipofectamine 2 000细胞转染技术下调CCL28表达;用Transwell和Matrigel观察肝癌细胞HCCLM3侵袭迁移情况;采用明胶酶谱法测定CCL28-siRNA干扰后细胞上清中的基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase enzyme,MMP)含量.应用实时定量PCR检测50例肝细胞癌组织中CCL28 mRNA表达情况,运用卡方检验和Kaplan-Meier法分析CCL28表达与临床病例特征及患者总体生存时间的关系.结果 肝癌HCCLM3细胞内CCL28 mRNA在缺氧培养6h后表达增高,蛋白水平在缺氧培养12 h后表达增高,呈时间依赖性.SiRNA抑制CCL28表达后,缺氧条件下HCCLM3细胞迁移数目(65.2±4.49)较siRNA阴性组(85±5.91)和空白组(87.4±8.44)有所减少(P<0.001);穿过Matrigel膜细胞数目(43.2±5.36)较siRNA阴性组(58±3.87)和对照组(54.6±9.53)有所减少(P=0.011).明胶酶谱法发现CCL28表达抑制后HCCLM3分泌MMP-2减少.PCR结果提示,肝癌组织CCL28 mRNA表达量为0.0254±0.0755,与正常肝组织相比,23例(46%)呈高表达,CCL28表达高低与肿瘤最大径(P=0.027)、术后复发相关(P=0.01
作者:周莹;张博恒;殷欣;任正刚
来源:复旦学报(医学版) 2013 年 40卷 3期