本研究以中华绒螯蟹内脏为材料,经过硫酸铵沉淀分级分离、两次DEAE-32离子交换柱层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化,获得比活力为4490.79U/mg、纯化倍数为28.07倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂.酶分子中各亚基的分子量分别为121.21、98.63和73.48 kD,等电点为4.5.以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,进行酶催化底物水解的反应动力学研究,结果表明:酶催化底物反应的最适pH为5.5,最适温度为45℃.该酶在pH4.9-9.3区域或40℃以下处理30min,酶活力保持稳定.酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.357 mmol/L,最大反应速度Vm为10.41μmol/L·min.酶催化pNP-β-D-GlcNAc反应的活化能为76.50kJ/mol.金属离子对酶的效应试验表明:Mg2+、Ca2+ 和 Ba2+对酶活力没有影响.Na+ 对酶有激活作用,Li+、K+、Zn2+、Hg2+、Pb2+ 、Cu2+和Al3+对酶活力表现出不同程度的抑制作用.
作者：黄小红；陈宏惠；黄一帆
来源：水生生物学报 2007 年 31卷 4期
