为了探讨日本鳗鲡(Anguillajaponica)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)的分离纯化及其酶学性质,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100分子筛凝胶柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化NAGase,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定酶的纯度、测定酶蛋白亚基分子质量;以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究NAGase催化反应的动力学参数,探讨其酶学性质.结果表明:日本鳗鲡肠道NAGase纯酶制剂比活力为2517.40 U/mg,酶蛋白亚基分子质量为69.98 kD,酶的最适pH、最适温度、米氏常数Km和最大反应速度Vmax分别为6.0、60℃、0.336 mmol/L和7.634 μmol/(L·min);酶在pH 4.8-7.2较稳定,在温度60℃以下具有较好的热稳定性,在65℃以上酶迅速失活.Mg2+、Ca2+、Mn2+、Cu2+和Fe3+对NAGase表现出不同程度的激活作用,Na+、Li+和Ba2+对酶活力几乎没有影响,Zn2+、Fe2+、Pb2+和Hg2+对酶活力有不同程度的抑制作用,Hg2+对酶活力抑制作用最强,1.0 μmol/L Hg2+可使酶活力丧失83.69％.化学修饰法研究表明,精氨酸胍基不是日本鳗鲡NAGase的必需基团,而赖氨酸ε-氨基、半胱氨酸巯基、组氨酸咪唑基、丝氨酸羟基和色氨酸吲哚基是酶的必需基团,二硫键是NAGase活性所必需的.综上所述,实验采用的日本鳗鲡肠道NA

作者：林建城；胡建辉；吴钦端

来源：水生生物学报 2022 年 46卷 9期