目的:研究针对VEGF基因的siRNA(small interference RNA)对乳腺癌MCF-7细胞细胞周期的影响.方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对VEGF基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA.脂质体转染法将合成的siRNA转染入MCF-7细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNAscr转染细胞为对照.用细胞计数法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响.流式细胞法检测细胞周期变化,RT-PCR法比较转染前后p21、CyclinD1表达水平的变化,Westernblot检测转染前后磷酸化ERK的表达.结果:细胞计数法结果显示,转染24 h后siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48 h后,抑制效率稳定.siRNA转染后能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞比例逐渐增多;p21mRNA表达显著上调,抑制Cyclin D1 mRNA及磷酸化ERK蛋白的表达.结论:体外转录合成的siRNA可能通过上调细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达,下调Cyclin D1及磷酸化ERK的表达,将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而显著抑制MCF-7细胞的增殖.
作者：张金玉；葛银林；张晓；侯琳；薛美兰
来源：现代生物医学进展 2009 年 9卷 15期
