目的:研究乳腺癌细胞中丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1基因表达下调后对其恶性生物表型的影响.方法:利用pSilencer4.1-CMVneo质粒,分别构建针对Plk1基因的RNA干涉载体(pSilencer4.1-shPlk1),利用脂质体Lipofectamine2000转染MCF-7细胞,G418筛选稳定的转染细胞系.半定量RT-PCR和Western blot分别检测Plk1基因mRNA和蛋白表达,MTT和克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化,最后分析MCF-7细胞对紫杉类药物(紫杉醇和多西他赛)化疗敏感性的变化.结果:成功筛选了稳定转染细胞系(MCF-7/shPlk1和MCF-7/shcontrol).同MCF-7/shPlk1细胞相比,MCF-7/shPlk1细胞中Plk1基因mRNA和蛋白表达水平分别下调65.8％和74.4％ (P＜0.05).同MCF-7/shcontrol,MCF-7/shPlk1细胞增殖速度显著抑制,到第5天时抑制率达到44.9± 3.2％ (P＜0.05).同时,MCF-7/shPlk1细胞的克隆形成能力显著降低(P＜0.01).流式细胞仪技术分析细胞周期结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的G2/M期细胞比例显著增加了21.1+ 4.1％,而S期细胞比例则显著降低了(18.5±3.1％；P＜0.05).流式细胞仪技术分析细胞凋亡结果表明:MCF-7/shPlk1细胞的凋亡率约显著增加了13.1±2.3％(P＜o.05).同时还发现:MCF-7/shPlk1细胞中激活的caspase-3蛋白显著增加,Bc

作者：耿怀成；王冰蝉

来源：现代生物医学进展 2011 年 11卷 20期