目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel )shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达栽体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹( Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与栽体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERG shRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.
作者：贠喆；马云雷；张涛；蔡承魁；韩康；杨彤涛；庞炜；周勇
来源：现代生物医学进展 2012 年 12卷 11期
