目的:构建膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin基因特异性短发卡RAN表达载体(small hairpin RNA,shRNA),探讨其对肾癌细胞株786-0细胞凋亡、增殖的影响.方法:以Ezrin为靶基因,以Pgenesil-1质粒为载体,设计和构建重组体,设计2条发夹式RNA(shRNA),合成后克隆入载体Pgenesil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体Lipofectamine 2000转染进786-0细胞,重组质粒转染786-0肾癌细胞株,用运实时荧光定量PCR进行筛选鉴定,筛选出抑制率较高的重组质粒载体shRNA-Ezrin1,用shRNA-Ezrin1转染786-0细胞,采用MTT、流式细胞仪、电镜检测,观察RNA干扰Ezrin后肾癌细胞株786-0细胞增殖能力的改变.结果:shRNA干扰后786-0细胞增殖活性减弱,G0/G1时段明显延长(P＜0.01),PI缩短(P＜0.01),细胞凋亡率增加(P＜0.01).结论:Ezrin与肾癌细胞凋亡、增殖有关,有望成为肾癌基因治疗的一个新靶点.
作者：杨旭凯；郭秀全；王养民；周逢海；蓝天；乔够梅
来源：现代生物医学进展 2014 年 14卷 25期
