目的:摸索及优选成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的实验方法.方法:将成年SD大鼠心脏剪成小组织块,采用以下四种方案(A:0.08％胰酶+0.1％胶原酶Ⅱ消化15min,B:0.2％胶原酶Ⅱ消化15 min,C:0.2％胶原酶Ⅱ消化60min,D:0.2％胶原酶Ⅱ消化90 min)提取成年大鼠心脏原代成纤维细胞,再通过差速贴壁分离方法培养原代成纤维细胞.采用倒置显微镜观察成纤维细胞的基本形态特征,并进行Vimentiin免疫荧光染色对培养的原代细胞进行荧光鉴定;采用台盼兰染色对培养的原代成纤维细胞存活率进行鉴定;采用细胞计数对培养的成纤维细胞生长趋势进行鉴定.结果:四种方法均能培养成纤维细胞,但单酶消化60 min可一次性提取较多细胞,并且细胞状态佳,3d即可传代.72 h成纤维细胞Vimentin免疫荧光染色阳性率高达97％.台盼兰染色可见其细胞死亡率明显降低,并且细胞计数可见细胞生长状态极佳.结论:单酶消化60 min是提取成年SD大鼠心肌原代成纤维细胞的高效、快速、稳定的实验方法,为心脏疾病的基础及临床研究提供了较为理想的细胞学实验模型.
作者：刘美丽；刘丹；刘艳霞；田孝祥；闫承慧
来源：现代生物医学进展 2016 年 16卷 27期
