目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1 (cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型.方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(shCYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(shNC,non-specific control),并通过阳离子脂质体LipoFiterTM介导转染人肝实质L02细胞,通过绿色荧光蛋白报告基因的表达指示及G418筛选阳性克隆,qRT-PCR (quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)测定稳定转染细胞系中CYP2E1的表达情况.结果:确定转染后G418最佳筛选浓度为400 μg/mL,维持浓度为200 μg/mL;获得了荧光表达率较高的L02-CYP2E1细胞(CYP2E1沉默组)和L02-NC细胞(转染对照组);qRT-PCR结果显示,所建细胞系L02-CYP2E1相对于L02-NC,其CYP2E1表达下调了近70％(P＜0.05),表明CYP2E1干扰表达细胞模型构建成功.结论:利用常规脂质体转染法成功转染人肝实质L02细胞CYP2E1 shRNA,建立了CYP2E1表达沉默的细胞系.
作者：周明；李浩；王子建；李登科；全正扬；孙震晓
来源：现代生物医学进展 2018 年 18卷 1期
