利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOX Ⅰ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA.重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经Sal Ⅰ线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到的转化子.PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到表达;Western b1ot分析表明发酵液上清中表达的融合蛋白PTH-HSA具有HSA的抗原性:用酶标法测定发酵上清中融合蛋白的甲状旁腺激素活性为318IU/ml.
作者：王俊；沈微；饶志明；诸葛健
来源：中国生物工程杂志 2007 年 27卷 2期
