将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经Pme Ⅰ线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF.采用Lipofectamine 2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有hKGF基因.获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞.Western blot结果显示,重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白.
作者：吴晓萍；曾耀英；贺芳
来源：中国生物工程杂志 2007 年 27卷 3期
