目的:构建含人白细胞介素10基因的慢病毒载体LV-hIL-10,观察鞘内注射LV-hIL-10对坐骨神经松结扎模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠的镇痛作用.方法:应用PCR从pCYIL-10质粒上扩增hIL-10基因,把hIL-10基因亚克隆至pWPXL质粒上得到重组质粒pWPXL- hIL-10,将pWPXL- hIL-10与psPAX2、pMD2.G共转293T,收集上清浓缩后制备LV-hIL-10.同时将空质粒pWPXL-GFP与psPAX2、pMD2.G共转293T,收集上清浓缩后作实验对照.纯种健康清洁级成年雄性SD大鼠135只,随机分为9组: CCI疼痛模型4组(C0、C1、C2、C3),假手术4组(S0、S1、S2、S3)和正常对照组(N组).给药组在蛛网膜下腔分别注射LV-hIL-10(C1组、S1组)、LV-GFP(C2组、S2组)、生理盐水(C3组、S3组),对照组C0组、S0组不做鞘内置管,不给药.各组在手术造模成功实施鞘内注射后观察LV-hIL-10组不同时间点痛阈的改变及脊髓、脑皮质、海马中的hIL-10 mRNA和蛋白表达.结果:获得IL-10 基因片段,成功重组pWPXL- hIL-10载体,经序列验证无误.质粒共转染293T细胞后,获得了高滴度(2×1010)、高纯度的LV-hIL-10病毒颗粒.CCI大鼠鞘内注射LV-hIL-10后痛觉异常明显缓解,脊髓、脑皮质、海马中的IL-10表达上调,脊髓中IL-10表达上调最显著.结论:鞘内注射慢病毒感染导入型人IL-10表达质粒

作者：贺正华；白念岳；郭曲练

来源：中国生物工程杂志 2008 年 28卷 8期