目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响.方法:构建Rosetta(DE3)、BL21 (DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗IgE单链抗体产量的影响.结果:携带抗IgE单链抗体基因的pET-IgE26质粒在新型宿主SoluBL21(DE3)中的表达产量明显优于传统的Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌.经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定SoluBL21(DE3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以M9培养基为基础,添加0.5％葡萄糖、0.6％酪蛋白胨和0.02％微量元素.最佳的培养条件为:以LB为种子培养基,37℃过夜培养至OD600为3.0左右,以5％接种量接种于最佳发酵培养基中；接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当OD600为1.5 ～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/L IPTG,220r/min继续培养16h.经抗原ELISA检测,抗IgE单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍.结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量.该研究结果不仅为规模化制备抗IgE单链抗体提供了技
作者：刘启刚；代云见；张勇侠；王保成；王明蓉
来源：中国生物工程杂志 2012 年 32卷 11期
