目的:研究枸杞抗坏血酸过氧化物酶基因(ascorbate peroxidase,LmAPX)在原核中的表达和酶学特性以及在酵母菌中的抗氧化能力,为进一步研究逆境诱导的抗氧化胁迫的作用机理奠定理论基础.方法:将LmAPX转入大肠杆菌BL21中进行异源表达,采用Ni2+亲和层析,纯化重组蛋白,并对不同温度和pH值下的酶活进行研究,Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax值.将LmAPX转入酵母菌株W303中进行H2O2和NaCl氧化胁迫处理.结果:该酶的最适温度和最适pH值分别为40℃和6.5.当抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)浓度过量时,对H2O2的Km和Vmax分别是0.17±0.02 mmol/L和11.78±1.88 mmol/min·mg;当H2O2浓度过量时,对AsA的Km和Vmax分别是2.19±0.40 mmol/L和58.82±3.51 mmol/min·mg.含有LmAPX基因的酵母菌株,在半乳糖的诱导下在8 mmol/L H2O2和100 mmol/L NaCl的培养基上的生长都明显优于对照组.结论:LmAPX蛋白具有很好的抗氧化性和耐盐性.
作者：高海伶；季静；王罡；吴广霞；荣非；关春峰；金超
来源：中国生物工程杂志 2014 年 34卷 7期
