目的:前期不同的研究分别证明HIV蛋白Nef下调宿主细胞表面受体CD4的表达,以及Nef与宿主细胞蛋白heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)存在相互作用.因此提出了两个值得研究探讨的重要问题:(1) hnRNPK是否参与调节细胞表面CD4的表达?(2) Nef是否通过hnRNPK调节细胞表面CD4的表达?方法:利用半体外GST-pulldown技术验证Nef与hnRNPK存在相互作用.通过瞬时转染的方式将HIV-1Nef表达在HeLa-CD4细胞里,同时利用siRNA干扰技术敲低hnRNPK,最后运用流式细胞技术检测细胞表面CD4的表达水平.结果:(1)GST-pulldown结果验证了Nef与hnRNPK存在相互作用;(2) Nef的表达使细胞表面CD4水平下降约75％;(3)不管是否有Nef,hnRNPK的敲低都使细胞表面CD4表达水平明显下降(50％);同样的,Nef下调CD4的作用也不受hnRNPK敲低的影响.结论:(1)hnRNPK与Nef相互作用;(2)hnRNPK有利于细胞表面CD4的表达,其与Nef的下调作用的关系尚不明确,Nef对CD4的下调作用可能涉及有其他因素参与的复杂调控.
作者：魏金梅；范小琴；熊海庭；高学娟；刘小会；刘朗夏
来源：中国生物工程杂志 2015 年 35卷 4期
