热休克蛋白70 (HSP70)作为一种分子伴侣,在环境毒理学中受到广泛研究.前期研究表明稀有鮈鲫HSP70基因(GrHSP70)表达量与五氯酚(pentachlorophenol,PCP)处理的浓度和时间在肝脏中呈现剂量/时间,依赖效应.为探究启动子在热休克蛋白70表达调控中的作用,根据已知的GrHSP70cDNA序列,采用染色体步移技术克隆了GrHSP70的5'侧翼区的核苷酸序列.生物信息学分析从预测的转录起始位点(C)起的5'侧翼区域共1 487bp,潜在的转录因子结合位点包括雌激素响应元件(ERE)、Sp1结合位点(Sp1)、糖皮质激素响应元件(GRE)、TATA结合蛋白(TBP)、CCAAT/增强子蛋白结合位点(C/EBP)、Oct-1结合位点(Oct-1)、GATA转录因子结合位点(GATA-1)等.实验构建了含有启动子缺失片段的萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(renilla luciferase)报告基因表达载体,瞬时转染HeLa细胞后,利用双荧光活性检测确定获得的GrHSP70启动子具有启动活性,其核心启动位点位于转录起始点上游-1 487～-1 093bp.同时,用不同浓度PCP暴露成功转染了重组质粒(pGL-HSP70 promoter-Luc+)的HeLa细胞,培养24h后检测双荧光活性,与对照相比,随PCP浓度的增加,荧光活性均显著增加.说明在稀有鮈鲫肝脏中PCP会通过激活GrHSP70启动子来诱导GrHSP70表达,但PCP在稀有

作者：黄宇；黄书婷；张夕梅；刘堰

来源：中国生物工程杂志 2019 年 39卷 10期