目的:GM1神经节昔脂贮积症是一种由半乳糖昔酶beta 1(galactosidase beta 1,GLB1)基因突变引起的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)活性降低导致的严重的溶酶体贮积病.该病以进行性、致命性神经退行性病变为特征,目前尚无有效的治疗手段,AAV载体介导的基因治疗被认为是最有希望的治疗方法.通过基因定点突变获得具有较高β-gal活性的GLB1突变体,以期用于后续AAV介导的基因治疗.方法:对人类和其他6种脊椎动物GLB1基因进行多序列比对分析,筛选出部分氨基酸位点进行定点突变,采用携带突变位点的重组质粒和AAV9载体转染或感染HEK-293细胞,比较突变体与未突变体的活性差异.对GM1模型鼠注射携带coGLBl-R299L的rAAV9病毒,探究该突变体的体内活性表达.结果:从15个突变体中筛选出coGLBl-R299L突变体,经质粒转染导入细胞后,其β-gal活性比具有野生型氨基酸序列的coGLBl增加了 30％～40％.AAV体外感染实验中,rAAV9-coGLBl-R299L组的β-gal活性较未感染的细胞对照组提升了约2.2倍.体内结果显示,rAAV9-coGLBl-R299L在模型鼠体内广泛表达,心脏、肝脏、脾脏、肺、脑组织中β-gal活性显著提升.结论:获得了具有更高β-gal活性的突变体coGLBl-R299L,初步探究了 rAAV9-coGLBl-R299L的体外表达效果和模型鼠体内β-半乳糖
作者：章嫣；马文豪；赵天意；吴小兵；盛望；杨怡姝
来源：中国生物工程杂志 2022 年 42卷 9期
