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取人胎肺做原代培养细胞,PMA诱导后,利用RT-PCR技术,扩增出了去掉N端信号肽序列的IL-11cDNA;经序列分析表明,该序列与文献报道序列高度同源,仅3个核苷酸有变化,氨基酸序列完全一致。将此IL-11cDNA克隆人硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRXFUS的trxA基因3′末端,利用其3′端的蛋白肠激酶切点,构建符合读码框的融合基因。该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达20%以上。用IL-6依赖细胞株7TD1及MTT法测定生物学活性,达2.56×105 u/mL菌液,对融合蛋白进行了Western blot测定,并对表达条件作了初步研究。

作者:张颖;刘灿辉;刘玉乐;田波

来源:生物工程学报 2000 年 16卷 3期

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作者:
张颖;刘灿辉;刘玉乐;田波
来源:
生物工程学报 2000 年 16卷 3期
标签:
人白细胞介素11 人胎肺原代培养细胞 RT-PCR 硫氧还蛋白融合蛋白表达体系 活性测定 Human interleukin 11 (hIL-11 ) primary culture of Chineses fetal lung fibroblast RT-PCR thioredoxin gene fusion expression system activity assay
取人胎肺做原代培养细胞,PMA诱导后,利用RT-PCR技术,扩增出了去掉N端信号肽序列的IL-11cDNA;经序列分析表明,该序列与文献报道序列高度同源,仅3个核苷酸有变化,氨基酸序列完全一致。将此IL-11cDNA克隆人硫氧还蛋白基因融合表达载体pTRXFUS的trxA基因3′末端,利用其3′端的蛋白肠激酶切点,构建符合读码框的融合基因。该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达20%以上。用IL-6依赖细胞株7TD1及MTT法测定生物学活性,达2.56×105 u/mL菌液,对融合蛋白进行了Western blot测定,并对表达条件作了初步研究。