应用PCR将人纤溶酶原信号肽序列引入K5 cDNA基因,与真核表达载体pcDNA3重组,形成重组质粒pcDNA3K5,与穿梭质粒pShuttle 重组得pShuttleK5,经与腺病毒DNA重组,PCR鉴定正确,即为pAd-K5.脂质体法将其转染293细胞后,制备细胞裂解液;噬斑分析法测定病毒滴度为5×108 pfu/mL.将病毒以不同的感染系数(MOI)感染人脐静脉内皮细胞株ECV304和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT法检测两者的增殖情况:ECV304细胞增殖受抑制,而MDA-MB-231细胞增殖未受明显影响.将感染病毒的ECV304细胞接种于ECMatrixTM胶,显示内皮细胞分化和毛细血管管腔形成受抑制.表明所构建的含人纤溶酶原K5基因的重组复制缺陷型腺病毒具有抑制ECV304细胞增殖、分化和管腔形成的作用而对MDA-MB-231细胞的生长则无影响.
作者：杨健；王跃祥；官孝群；马春姑；王龙生；宋后燕
来源：生物工程学报 2003 年 19卷 2期
