[目的]构建hTERT特异性RNAi腺病毒载体,并研究该载体对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,为针对端粒酶的乳腺癌基因治疗提供新的途径. [方法]设计针对人端粒酶逆转录酶催化亚基(hTERT)的干扰靶序列GGAACACCAAGAAGTTCATCT,构建RNAi腺病毒载体rAd-shRNA-hTERT.同时构建不针对任何基因的shRNA阴性对照rAd-shRNA-HK和只含EGFP的tAd-EGFP对照.转染人乳腺癌MCF-7细胞后48 h,以荧光定量PCR和免疫印迹法检测MCF-7细胞hTERT基目的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡情况. [结果]病毒载体经酶切、电泳分析表明插入序列正确,构建成功;转染MCF-7细胞后,rAd-shRNA-hTERT组可明显抑制hTERT基因表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡. [结论]通过腺病毒介导的RNAi技术可有效抑制MCF-7细胞中hTERT基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡,有望用于肿瘤的基因治疗.
作者：刘岚；陈绍坤；税青林；赵娇；余红；曾永秋；赵小平
来源：现代预防医学 2010 年 37卷 6期
