为了获得结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达,将人α-2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat-6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K,将重组表达质粒pPIC9K-α2a-esat6用Sal Ⅰ单酶切之后,电击转入Pichia pastoris SMD1168中,采用G418梯度筛选获得高抗性转化子.以甲醇作为诱导物,发酵4d后取上清,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定并分析表达产物的干扰素活性.结果表明,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为30kD的融合蛋白,表达产物不仅具有较高的干扰素活性,而且可以和结核病人血清发生特异性结合,为结核病的特异性诊断和结核病新型疫苗的研制打下了基础.
作者：刘林；赵志安；王洪海；宋大新
来源：生物工程学报 2004 年 20卷 6期
