本研究在完成Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)As01株全基因组测序的基础上,采用融合PCR扩增得到含有15个C碱基的5'端片段(约1800 bp),并利用长片段PCR扩增得到基因组3'端片段(约6700 bp).再利用单一的酶切位点将2个片段克隆到pBluescript SK载体中,从而获得携带As01株基因组全长cDNA的重组质粒pBSAs.将该质粒线性化后作为模板体外转录并转染BHK-21细胞,可观察到典型的细胞病变.对收获的病毒采用RT-PCR、间接免疫荧光和电镜观察等检测及鉴定,结果表明,拯救出了具有感染性的Asia1型FMDV.拯救毒与亲本毒对乳鼠的致病力(LD_(50))差异不显著,具有相似的生物学特征.该感染性克隆的构建,为深入研究FMDV的致病机理及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台.
作者：李爽；张润祥；宋鸽；高明春；刘湘涛；王君伟
来源：生物工程学报 2009 年 25卷 11期
