金黄色葡萄球菌核酸酶A (Staphylococcal nucleaseA,SNA)可用于菌蜕制备中宿主菌的进一步灭活及残存遗传物质的去除.关于SNA在去除了信号肽后是否仍能分泌至胞外以及是否需要融合其他氨基酸片段才能在宿主菌胞质中发挥作用尚存争议.为厘清这一争议,分别构建一系列含SNA、SNA与λ噬菌体cro基因或结核杆菌脲酶基因部分序列的融合片段cSNA或uSNA的温控质粒并对其在大肠杆菌内的作用进行评价.结果显示,SNA、cSNA和uSNA的表达产物对大肠杆菌的4h灭活率分别为99.9％、99.8％和74.2％.升温诱导30 min后,SNA和cSNA即可在宿主菌胞内被检出,而uSNA需1 h;相较之下,SNA和cSNA在培养液上清中的被检出时间要晚lh,uSNA则晚2h.对三者的核酸酶活性检测均为:SNA＞ cSNA＞ uSNA,且胞外活性都显著低于胞内.此外,SNA和cSNA在诱导2h后即将宿主基因组成功降解,而uSNA则在整个实验期间均未能使宿主基因组完全降解.这表明SNA、cSNA和uSNA的表达产物均具有核酸酶活性,可被动释放至胞外,外源DNA片段的融入反而会降低SNA的核酸酶活性.
作者：付立霞；冀德君；卢徐斌；韩先干；魏文志
来源：生物工程学报 2016 年 32卷 12期
