精氨酸激酶(Arginine kinase,AK)是无脊椎动物体内能量代谢的关键酶,在生长发育、营养利用、免疫抗性、胁迫应答等生命活动过程中发挥着重要的调控作用.家蚕精氨酸激酶BmAK与能量平衡、抗NPV病毒过程相关,但目前关于其分子结构和酶学性质的研究不多.克隆了BmAK基因ORF序列,分析了其染色体定位、基因组结构、mRNA结构、二级结构和三级结构.进化分析表明AK在进化过程中高度保守.原核表达获得了可溶性的BmAK重组蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化了BmAK.圆二色光谱分析显示BmAK包含α螺旋结构,其α螺旋结构在pH 5-10范围内相对稳定.酶活分析表明BmAK的最适温度为30℃,最适pH为7.5.25℃时BmAK的催化活性最大,在15-30℃范围内,BmAK的结构相对稳定,活性差别不大.BmAK的结构在pH 7.0左右相对稳定.这些研究为揭示BmAK的结构和功能提供了基础,有助于开发以AK为分子靶标的绿色安全环保的新型杀虫剂.
作者:何华伟;王叶菁;赵敏健;位曙光;赵朋;蒋文超;刘莉娜;赵萍
来源:生物工程学报 2017 年 33卷 7期