为提高L-苯乳酸(L-phenyllactic acid,L-PLA)的生产效率,以干酪乳杆菌Lactobacillus casei L-乳酸脱氢酶突变体L-LcLDH1Q88A/I229A为研究对象,实现其在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的分泌表达,并与葡萄糖脱氢酶SyGDH偶联,构建并优化体外辅酶循环体系,不对称还原苯丙酮酸(Phenylpyruvate,PPA)制备L-PLA.结果 显示,毕赤酵母重组酶reLcLDH1Q88A/I229A的表观分子量为36.8 kDa,比活力为270.5 U/mg,是原酶的42.9倍.在40℃,初始pH为5.0,底物PPA、辅酶NAD+和葡萄糖浓度分别为100、2和120 mmol/L,SyGDH和reLcLDH1Q88A/I229A添加量分别为1和10 U/mL的最优条件下,L-PLA的产率可达99.8％,对映体过量(ee)值＞99.9％,时空产率和平均转化率分别高达9.5 g/(L·h)和257.0 g/(g·h).结果 表明,reLcLDH1Q88A/I229A在不对称还原PPA制备L-PLA中生产效率高,具有工业应用的潜力.
作者：张婷；李剑芳；胡蝶；李闯；胡博淳；邬敏辰
来源：生物工程学报 2020 年 36卷 5期
