利用PCR技术从少根根霉中扩增出脂肪酶基因(包括前导序列和成熟肽),并将其连接到酵母分泌表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115.利用抗生素G418从重组阳性克隆中筛选得到高拷贝的转化子.在5 L的发酵罐中,当碳源耗尽后开始流加甲醇诱导脂肪酶的表达,经过96h培养后发酵液上清液中重组脂肪酶(rRAL)的表达量约为90mg/L.rRAL经过超滤,SP-Sepharose离子交换层析和Butyl-Sepharose疏水层析纯化.纯化后的蛋白在SDSPAGE上为单一条带,表观分子量为32 kDa,比酶活为1543 U/mg.N-端序列分析表明rRAL是经过加工后的产物.同时没有发现全长的Rhizopus arrhizus脂肪酶(RAL)被分泌表达.
作者：牛卫宁；谭天伟
来源：生物加工过程 2006 年 4卷 2期
