研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ3-HSA过程中产物降解的问题.十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×104的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了6.5×104的降解带,进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ-HSA的HSA区域.在此基础上,采用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)活性电泳的方法,确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中,引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B(Proteinase B,PrB).最后.确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA,通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA,使融合蛋白的表达量达到22.18mg/mL,与空白对照组相比增加了61
作者：宋一丹；窦文芳；许泓瑜；金坚；陆茂林；许正宏
来源：生物加工过程 2008 年 6卷 5期
