目的:克隆人抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)cDNA,建立在大肠杆菌中原核表达并纯化人OAZI-1蛋白的实验技术.方法:巢式RT-PCR法从人A549总RNA中扩增人OAZI-1 cDNA并构建pET-28a/OAZI-1原核表达质粒.该质粒转化大肠杆菌原核表达菌BL21(DE3)后IPTG诱导表达.诱导表达出的重组蛋白用Ni-NTA树脂亲和层析纯化.SDS-PAGE和Western法检测重组OAZI-1蛋白的表达和纯化.结果:成功克隆出编码全长人OAZI-1的cDNA序列,并构建出原核表达质粒pET-28a/OAZI-1.DNA测序分析,重组质粒中的OAZI-1 cDNA无突变,与6 × His标签框架对接正确.重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中后,可用IPTG诱导表达出重组OAZI-1蛋白,该重组蛋白可用Ni-NTA树脂亲和层析纯化.结论:成功建立了人抗酶抑制因子的原核表达和纯化的实验方法,为后续OAZI-1的功能研究奠定了基础.
作者：何玲；韩钰；王艳林
来源：生物技术 2010 年 20卷 1期
