利用PCR方法以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae S288c基因组DNA为模板,PCR扩增γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH1)及谷胱甘肽合成酶(GSH2)基因,以乙醇脱氢酶(ADH1)启动子进行表达,并以Kan'基因和Hyg'基因作为筛选标记,构建了两个重组表达质粒YEplace181AK-GSH1和YEplace181AH-GSH2.采用电击法将这两个质粒分别和同时转入工业酿酒酵母菌株Saccharomyces cerevisiae TS013,在含有G418或(和)Hygromycin的平板上筛选阳性克隆S.TS013/GSH1、S.TS013/GSH2和S.TS013/GSH1+GSH2.重组菌进行摇瓶发酵,采用四氧嘧啶法测定培养细胞合成谷胱甘肽含量.结果显示,不同转化子重组菌的胞内谷胱甘肽产量比宿主菌分别提高了44.11％、29.79％和56.47％.
作者：陈加利；吴量；王娟；段学辉
来源：生物技术通报 2013 年 8期
