γ-PGA是微生物合成的一种新型高分子生物可降解材料,基因工程菌株的构建对于其合成机理及开发生产具有较高的研究价值.利用Self-Formed Adaptor PCR(SEFA-PCR)方法扩增出菌株B. amyloliqueficiensC1的γ-PGA合成酶基因簇pgsBCAE,将其克隆到表达载体pET29a(+)中并转化至表达宿主E.coli BL21(DE3).结果表明,转化所得的工程菌株在IPTG诱导下通过摇瓶发酵生产0.14 g/L的γ-PGA.Mn2+和Zn2+能够显著促进重组子E.coli BL21(pET29α-pgsBCAE)发酵合成γ-PGA的产量,并且这种促进作用随着Mn2+和Zn2+浓度的提高而越加显著.Mg2+在低浓度(1 mmol/L)下也促进重组子合成γ-PGA,之后随着Mg2+浓度的升高,这种促进作用逐渐减弱,当Mg2+浓度达到4 mmol/L时,反而抑制重组子γ-PGA的合成.菌株B. amyloliqueficiensC1基因组内含有完整的γ-PGA合成酶基因簇pgsBCAE,该基因簇能够在表达宿主E. coli BL21中被诱导表达并合成γ-PGA,且其γ-PGA的合成受金属离子的影响.
作者：王世锋；何剑；陈怡露；郑涛；沈其荣；雍晓雨
来源：生物技术通报 2015 年 31卷 5期
