目的:构建雌激素受体(ER)β的哺乳动物细胞表达载体,并检测其转录活性.方法:利用PCR扩增带有Flag标签的人类ERB全长编码序列,将扩增片段克隆到哺乳动物细胞表达载体pIRESpuro2中,得到重组质粒pIRESpuro2-Flag-ERβ;用Western blot鉴定Flag-ERB重组蛋白在人胚肾293T细胞中的表达;用含雌激素应答元件(ERE)的报告基因系统检测Flag-ERβ的转录活性.结果:构建了pIRESpuro2-Flag-ERβ重组质粒,其介导的融合蛋白在293T细胞中得到表达,并可以激活含ERE的报告基因的表达.结论:ERB高效真核表达载体的构建,为进一步研究ERβ在乳腺癌等疾病中的功能奠定了基础.
作者：李勤操；何宝祥；杨智洪；丁丽华；李杰萍；张浩；袁斌；叶棋浓
来源：生物技术通讯 2008 年 19卷 5期
