目的:表达和纯化幽门螺杆菌不同菌株的CagA蛋白N端片段,检测其与磷脂酰丝氨酸(PS)的相互作用及亲和力.方法:用PCR方法从幽门螺杆菌3个菌株中扩增出CagA蛋白N端基因,并连接到表达载体pET-28a上；转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可溶性表达CagA蛋白N端880残基片段；经镍柱亲和纯化后,利用PLOA法检测CagA蛋白与PS的相互作用.结果:构建了3种幽门螺杆菌菌株cagA基因的原核表达质粒pET-28a/cagA199、pET-28a/cagA11637及pET-28a/cagASSI,并在大肠杆菌中获得可溶性表达,SDS-PAGE和Western印迹证实得到目标融合蛋白,亲和纯化得到高纯度CagA蛋白.PLOA结果表明,CagA蛋白与PS有明显的相互作用.结论:3种幽门螺杆菌菌株CagA蛋白与PS之间存在相互作用,且不同的CagA与PS有不同的亲和力.
作者：管张燕；王芃；陶好霞；袁盛凌；王艳春；申严杰；王令春；刘纯杰
来源：生物技术通讯 2011 年 22卷 5期
