目的：利用枯草杆菌芽孢呈递技术制备表达SARS冠状病毒S蛋白受体结合区（RBD）的重组芽孢。方法：将枯草杆菌CotB基因构建到基因组整合质粒pDG1664中，再将RBD基因连接到CotB基因的下游，构建成重组质粒pDG1664-CotB-RBD，通过同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中；利用红霉素抗性筛选重组菌并进行PCR和DNA测序鉴定，Western印迹鉴定重组菌芽孢表面RBD蛋白的表达情况；用表达RBD的重组芽孢以口服方式免疫小鼠，通过ELISA和流式细胞术检测重组芽孢的免疫原性。结果：制备出枯草杆菌基因组整合了RBD抗原基因的重组菌株RS1931，形成的重组芽孢表达相对分子质量约62×103的CotB-RBD融合蛋白；重组芽孢免疫的小鼠血清RBD抗原特异性IgG抗体滴度在末次免疫后2周可达1∶10880，重组芽孢初免后18周的小鼠脾细胞中IFN-γ+CD4+、IL-4+CD4+和IFN-γ+CD8+ T细胞比例上调，表明重组芽孢经口服免疫产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。结论：针对SARS冠状病毒S蛋白RBD建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法，制备出在枯草杆菌芽孢表面稳定表达外源RBD蛋白的重组株，获得的重组芽孢具有良好的免疫原性，为开发芽孢呈递型SARS疫苗奠定了基础。
作者：苗雨；张珍珍；郭彦；唐健；邱洪杰；于虹；孙世惠；寇志华；赵光宇；周育森
来源：生物技术通讯 2013 年 3期
