目的：构建带线粒体锚定信号肽的凋亡诱导因子（AIF）融合表达载体，研究在A549细胞中AIF线粒体锚定与其抗氧化应激功能的关系。方法：利用PCR将AIF原有线粒体定位信号（1~120 aa）替换成具有锚定功能的细胞色素c氧化酶Ⅳ亚型（COX Ⅳ）线粒体定位信号，并将COX-AIF克隆至pEGFP-N1和pDsRed1-N1载体，构建COX-AIF-GFP和COX-AIF-RFP融合表达载体；利用免疫印迹和激光共聚焦技术检测COX-AIF-GFP和COX-AIF-RFP的表达及其与线粒体的共定位；利用DCF染色和流式细胞技术检测A549细胞内过氧化物的水平。结果：表达了COX-AIF-GFP和COX-AIF-RFP融合蛋白，COX-AIF-GFP/RFP及AIF-RFP/RFP均定位于线粒体；与野生型AIF-RFP相比，COX-AIF-RFP可显著提高A549细胞的抗氧化应激能力。结论：AIF抗氧化应激能力依赖其在线粒体内膜的锚定。
作者：凌丽君；刘萱；曹诚
来源：生物技术通讯 2013 年 4期
