目的：构建带FLAG标签的人1型酪蛋白激酶（CK1）基因的真核表达载体，获得其表达产物，并研究该激酶在骨肉瘤U2OS、乳腺癌ZR-75-1、肝癌HepG2等多种肿瘤细胞中的表达及定位情况。方法：应用PCR技术从人乳腺文库中扩增人CK1基因的全长编码区，将其克隆到带FLAG标签的pCMV-Tag2B载体中；将重组质粒转染骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞，以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达情况；细胞免疫荧光观察FLAG-CK1质粒在骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞中的细胞定位。结果：双酶切和测序结果显示FLAG-CK1真核表达质粒构建成功；SDS-PAGE和Western印迹结果表明，FLAG-CK1转染骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞后成功表达；细胞免疫荧光实验显示，CK1在骨肉瘤U2OS细胞、乳腺癌ZR-75-1细胞、肝癌HepG2细胞的胞核和胞质中均有分布，且胞核信号强于胞质。结论：构建了CK1的真核表达载体，且FLAG-CK1能在不同肿瘤细胞系的细胞核和细胞质中表达，为进一步研究CK1对细胞的调控奠定了实验基础。
作者：冀全博；徐小洁；张强；康磊；李玲；黄蓉；周丽英；王荣福；王岩；叶棋浓
来源：生物技术通讯 2014 年 4期
