目的：构建一种可调控肝细胞特异性表达丙型肝炎病毒（HCV）全基因的小动物模型。方法：将9.6 kb的HCV全长基因JFH1插入Tet-on系统效应表达载体pTRE2中，并在HCV全基因3'端插入丁型肝炎病毒（HDV）核酶序列，从而构建转基因载体pTRE2-JFH1（HCV）；将该转基因载体线性化后显微注射获得整合有HCV全基因的TRE2-HCV首建鼠；将该阳性鼠与本室保存的Alb-rtTA转基因小鼠杂交，获得肝细胞白蛋白启动子调控HCV全基因表达的Tet-on-Alb-HCV双转基因小鼠；在强力霉素（Dox）诱导后通过PCR、Western印迹、免疫组化等方法鉴定转基因小鼠HCV基因整合及HCV蛋白在肝组织中的表达；实时定量PCR检测小鼠血清及肝组织中的HCV滴度；用HCV反义小分子药物anti-miR122评价该模型在药物评价中的应用。结果：获得了整合rtTA基因和HCV全长基因的双转基因小鼠；Dox诱导下，该转基因小鼠可在肝组织长期特异性表达HCV全长基因，小鼠血清中可检测到HCV的RNA；分子药物anti-miR122可降低血清中的HCV滴度。结论：构建了可调控肝组织特异性表达HCV全基因的转基因小鼠模型，该小鼠模型可应用于HCV药物筛选和评价研究。
作者：高同同；刘晨风；姜玉庭；王友亮；吴小红；曾扬；赵亚光；郭彦；于虹；赵光宇；高基民；孙世惠；周育森
来源：生物技术通讯 2015 年 2期
