目的:构建带GST标签的人β肌动蛋白(β-actin)基因的原核表达产物,纯化出GST-β-actin融合蛋白,为探究β-actin的各项生理功能做准备.方法:以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增β-actin基因,将其连接到带有GST标签的载体上,经鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rossate感受态细胞,小量诱导表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化GST-β-actin融合蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹检测.结果:目的基因经PCR技术得以扩增,将其与带GST标签的载体连接后再经双酶切鉴定及测序后确认构建成功;转化大肠杆菌Rossate感受态后获得小量诱导表达,纯化出GST-β-actin融合蛋白,并证实其有生物活性.结论:构建了人β-actin的原核表达载体,并获得了GST-β-actin融合蛋白.
作者：宋烨琼；郭靖；徐小洁；李玲；梁迎春；洪甜；纪贝贝；叶棋浓；吕朝晖
来源：生物技术通讯 2015 年 26卷 6期
