目的:建立CRISPR/Cas9系统用于敲除人源雌激素受体α(ERα)基因(ESR1),并利用此细胞模型初步检测ESR1基因对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法:设计一个靶向人源ESR1基因第2外显子的单向导RNA (sgRNA),分别克隆表达载体后,通过慢病毒转入人乳腺癌细胞株MCF-7,Western印迹检测MCF-7中ESR1基因的敲除效果,通过Transwell、反向侵袭试验观察ESR1基因敲除后对细胞侵袭能力的影响.结果:测序结果显示靶向ESR1基因CRIS-PR/Cas9重组质粒构建成功;Western印迹显示Cas9-ERα组的MCF-7细胞内ERα表达水平较对照组显著降低;Tan-swell、反向侵袭试验证实ESR1基因敲除能够促进乳腺癌细胞的侵袭能力.结论:通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向ESR1基因的重组质粒,构建的重组质粒能有效敲除ESR1基因;ERα能够抑制乳腺癌细胞的侵袭能力.
作者：孙嘉慧；栗梓仓；李志科；韩丹丹；鲍树森；曾诚；张存
来源：生物技术通讯 2017 年 28卷 6期
