目的用人工合成的钠-钙交换体α-1和α-2重复序列作为抗原,制备并纯化抗α-1和α-2重复序列抗体.方法通过主动免疫大鼠,获得抗血清.采用酶联免疫吸附测定法(SA-ELISA) 测定抗体滴度,并将高滴度抗血清(≥1∶640)上样至HiTrap Protein G HP 进行亲和层析对抗体进行纯化.纯化效果用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并采用Bradford蛋白质定量法对纯化后抗体进行定量.结果大鼠经主动免疫后,抗α-1抗血清滴度从免疫前的1∶(25.5±1.5)升高到1∶(905.1±2.2)(P＜0.01);抗α-2抗血清滴度从免疫前的1∶(26.4±1.5)升高到1∶(1 076.3±2.0)(P＜0.01).纯化后的抗α-1和抗α-2重复序列抗体电泳时都仅有一条带出现,分子量160 kDa左右,与IgG标准品相一致.用Bradford蛋白质定量法测得抗α-1和α-2抗体浓度分别为1.0 mg/ml和1.2 mg/ml. 结论本研究获得了高纯度、高滴度的抗α-1抗体,为下一步对其进行功能研究奠定了基础.
作者：封启龙；范国权；赵嘉惠；赵画晨；吴博威
来源：山西医科大学学报 2005 年 36卷 4期
