目的构建His标记的小鼠精子发生相关基因SRG-S的原核表达载体并实现其表达及纯化. 方法提取小鼠睾丸组织总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 扩增目的基因片段,克隆入pGEM-T-easy载体,经测序正确后,定向亚克隆入pET-30a(+)表达载体,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,并利用抗His单克隆抗体进行Western blot检测. 结果 RT-PCR扩增得到大小约591 bp的目的基因片段,DNA序列分析结果与GenBank公布的序列一致,SDS-PAGE电泳显示经IPTG诱导有约32 kD的重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度达90
作者：郭睿；张悦红；张建林；张栋；解军
来源：山西医科大学学报 2006 年 37卷 5期
