目的构建MAGE-n的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,并通过谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferse,GST)纯化系统进行分离纯化.方法用ANTHEPROT V5.0软件预测MAGE-n的生物学特性,从中选择抗原性及特异性较强的一段.利用PCR方法扩增MAGE-n基因片段,连入原核表达载体pGEX-4T-1,构建MAGE-n的原核表达质粒pGEX-MAGE-n并测序.将该质粒转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达和分离纯化.结果成功地扩增了MAGE-n基因片段,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了pGEX-MAGE-n原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后表达一Mr约为43 000的蛋白,经GST融合蛋白纯化系统纯化,得到了MAGE-n的重组蛋白.结论首次获得了新的肿瘤抗原MAGE-n的重组蛋白,并进行分离纯化,为进一步研究MAGE-n抗原在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础.
作者：黄亚渝；隋延仿；叶菁；董海龙；陈广生；张秀敏
来源：免疫学杂志 2004 年 20卷 2期
