目的 重组、表达与纯化弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)具有生物活性的功能多肽,分析其抗原性.方法 根据SAG1的基因序列设计引物,截除其前端的信号肽和后端的疏水区,只扩增650 bp的功能区域;将该片段重组入带有His标签的pET-30a(+)质粒,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在E.coli中表达,调整诱导表达时间、IPTG浓度等条件,高效稳定地表达出目的 蛋白;镍柱亲和层析法纯化目的 蛋白,Western-blot检验纯化后蛋白的抗原性.结果 成功构建pET-30a(+)/SAG1重组质粒,使其在E.coli中高效稳定地可溶性表达,并确定出在0.5 mmol/L IPTG浓度下诱导12 h为最佳表达条件,Western-blot显示纯化后的蛋白具有良好的抗原性.结论 获得了可溶性的弓形虫SAG1基因功能片段表达的产物,其具有良好的抗原性.
作者：张建伟；王海龙；殷国荣；刘转转；刘晋平；赵丰
来源：山西医科大学学报 2009 年 40卷 6期
