目的 克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)磷酸甘油酸变位酶2(TgPGAM2)基因片段,并分析其抗原性.方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA.PCR扩增TgPGAM2基因.扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序.将测序正确的重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2转化至E.coli BL21并加入异丙基-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性.结果 PCR扩增产物约为750 bp.菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgPGAM2构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约30 000的可溶性重组蛋白.Western blotting分析证实其能被兔抗弓形虫血清识别.结论 刚地弓形虫RH株TgPGAM2基因片段可在原核表达系统中表达,且该可溶性重组蛋白具有抗原性.
作者：殷丽天；王芬；孟晓丽；王海龙；刘红丽；申金雁；殷国荣
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012 年 30卷 2期
