目的 克隆、表达刚地弓形虫苹果酸脱氢酶(TgMDH)基因,并分析其免疫原性. 方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgMDH的基因编码序列(GenBank登录号为AY650028)设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落.重组质粒pET30a(+)-TgMDH转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.优化表达条件,获得大量可溶性蛋白.经镍亲和层析法纯化后滴鼻免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗重组rTgMDH蛋白血清.分别以小鼠抗rTg-MDH血清和兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析rTgMDH蛋白的免疫原性. 结果 Tg-MDH基因RT-PCR扩增产物约为951 bp.经双酶切、PCR和测序结果显示重组质粒pET30a(+)-TgMDH构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约36 000的可溶性重组蛋白.Western blotting分析结果显示,rTgMDH蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和兔抗弓形虫血清识别. 结论 本研究克隆的TgMDH基因序列能在原核表达系统中高效表达,且具有免疫原性.
作者：刘转转；杨燕萍；殷国荣；王海龙；李雅清；祝建疆；刘宜升
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013 年 31卷 1期
