目的：探讨铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法30株对环丙沙星耐药的铜绿假单胞菌，采用 PCR方法扩增DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的基因 gyrA，gyrB，parC和 parE，再测序查找是否存在位点突变，同时用脉冲场电泳（pulsed-field gel electrophoresis，PFGE）对菌株进行同源性分析。结果30株菌中，28株菌出现 gyrA基因扩增片段的137位点均有C→T突变，导致T83I改变；17株菌gyrB基因扩增片段的351位出现G→C突变，导致G466A改变；21株菌的 parC基因扩增片段的277位点有 C→U 突变导致 S87L 改变；2株菌 parE 基因在不同位点出现 C→U 突变，导致A425V和 A473V改变。30株菌可分为6个克隆，其中 A克隆4株，仅有 gyrA突变；B克隆7株，有 gyrA和 parC两种基因发生突变；C克隆3株，有gyrA和gyrB两种基因发生突变；D克隆14株，同时有 gyrA，gyrB和 parC三种基因发生突变；其他克隆2株，仅在 parE位点发生突变。结论该组菌株的靶位突变型与流行克隆型密切相关，同一流行型的菌株药物作用靶位的改变相同，并与环丙沙星的 MICs值的高低呈正比，突变基因数越多，MICs 值越高。4种基因中 gyrA基因突变频率最高，且该突变比其他靶位的突变对药物与靶位结合的影响更大，是需要关注的重点。
作者：王颖；黄梅；奚海燕；李玲慧；史利宁；王卫萍；邵海枫
来源：现代检验医学杂志 2014 年 6期
