目的:构建并鉴定CX43-IRES2-EGFP的重组腺病毒小质粒表达载体,观察其在人胃癌BGC-823细胞系中的表达.方法:将目的基因CX43片段与IRES2-EGFP进行PCR拼接,重组到腺病毒穿梭载体pAd/CMV/V5-DEST上,构建成腺病毒表达载体pAd-CX43-IRES2-EGFP;经酶切后转染293A细胞进行包装,测定滴度;重组病毒转染人胃癌BGC-823细胞后,通过RT-PCR检测耐药基因MDR的变化,Westernblot检测CX43超表达.结果:经测序验证,腺病毒载体pAd-CX43-IRES2-EGFP构建成功.pAd-CX43-IRES2-EGFP病毒的滴度为:2.8×106 ifu/ml.转染人胃癌BGC-823细胞后经Western blot检测到CX43蛋白超表达,耐药基因MDR受到抑制.结论:成功构建腺病毒载体pAd-CX43-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,检测其对人胃癌BGC-823细胞系具有超表达CX43和抑制耐药基因MDR的作用,为CX43基因转染的研究及基于CX43为靶标的基因药物筛选平台的奠定了基础.
作者：吴瑾；刘文涛；李永庆；周红凤；刘丹；岳晓龙；孙喜文；石光跃；赵艳滨；王亚丽；仇鑫
来源：现代肿瘤医学 2012 年 20卷 11期
