目的:构建ALK5激活型真核表达质粒Flag-ALK5 T204D,证实融合蛋白在肾癌细胞内表达,并验证其对TGF-β信号通路的激活作用.方法:以野生型ALK5质粒为模板,采用重叠延伸PCR方法进行定点突变;将构建的重组质粒测序并转染到肾癌细胞ACHN中,提取细胞蛋白进行Western blot检测;利用双荧光素酶报告基因分析,检测该突变体对TGF-β信号通路典型靶基因启动子的激活作用.结果:对ALK5的表达序列进行定点突变,构建了ALK5激活型真核表达质粒Flag-ALK5 T204D;Western blot检测到融合蛋白的表达,分子量约为58kDa;Flag-ALK5 T204D能够上调TGF-β信号通路典型靶基因启动子活性.结论:成功构建了Flag-ALK5 T204D并验证了其对TGF-β信号通路的激活作用,为进一步研究ALK5的生物学特性及其功能奠定了基础.
作者：李英杰
来源：现代肿瘤医学 2016 年 24卷 8期
